谷研試劑-縱隔原發(fā)性大B細(xì)胞性淋巴瘤免疫組化和DNA倍體研究

摘要　目的：研究縱隔原發(fā)性大B細(xì)胞性淋巴瘤的臨床病理、免疫組化及DNA倍體的表現(xiàn)。方法：采用常規(guī)石蠟切片、HE染色及免疫組化染色ABC法。另對(duì)6 μm厚石蠟切片采用Feulgen染色，應(yīng)用細(xì)胞影像儀對(duì)腫瘤細(xì)胞核的DNA倍體進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：腫瘤細(xì)胞特點(diǎn)為瘤細(xì)胞較大，呈彌漫分布，其間可見寬窄不一、成束或帶狀的纖維結(jié)締組織穿插分割。免疫組化染色瘤細(xì)胞表達(dá)LCA及L26陽(yáng)性，IgA及κ弱陽(yáng)性。經(jīng)細(xì)胞影像儀測(cè)定瘤細(xì)胞DNA呈高異倍體，DNA質(zhì)量的分布呈高度異質(zhì)性。結(jié)論：來(lái)源于胸腺B淋巴細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞DNA倍體測(cè)定結(jié)果對(duì)于患者預(yù)后的判斷可能具有非常重要的意義。
關(guān)鍵詞　縱隔腫瘤；淋巴瘤；DNA倍體；免疫組織化學(xué)
中國(guó)圖書分類號(hào)　R734.5； R733.4　　文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼　A　　文章編號(hào)　00-7399（999）0-002-03

Immunohistochemistry and DNA ploidy of primary large B cell lymphoma in mediastina

Lü Xiang, Meng Fanqing, Zhou Siqiao et al
(Nanjing Drum Tower Hospital, The Affiliated Hospital of Nanjing Univerisity Medical School, Nanjing　20008)

ABSTRACT　Purpose　To investigate the characteristics of clinicopathology, immunohistochemistry and the DNA ploidy measurement for the primary large B cell lymphoma in mediastina. Methods　The routine paraffin slides were cut and stained with HE as well as ABC immunohistochemical technique. In addition, the 6 μm thick paraffin slides were cut and stained by Feulgen method. Then the DNA ploidy of tumor cells were measured with image cytometer. Results　The morphological characteristics of tumor cells were that the sheets of diffusely distributed large lymphocytes were penetrated by bundles of fibroconnective tissue. In immunohistochemically stained slides, the tumor cells were LCA and L26 positive, IgA and κ weakly positive. The DNA ploidy measurement results showed that the tumor cells were high aneuploidy and the distribution of DNA contents were highly heterogeneous. Conclusion　The neoplasm may originate from the B lymphocyte in thymus. The result of the DNA ploidy measurement of the tumor cells suggests that it might have very great significance for the prediction of the prognosis of the patient.
KEY WORDS　mediastina; lymphoma; DNA ploidy; immunohistochemistry

縱隔原發(fā)性大B細(xì)胞性淋巴瘤罕見，國(guó)內(nèi)鮮有報(bào)道。我們對(duì)例縱隔原發(fā)性大B細(xì)胞性淋巴瘤進(jìn)行了臨床病理、免疫組化及DNA定量測(cè)定的研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

　材料和方法

標(biāo)本采用0%甲醛固定，常規(guī)石蠟切片，HE染色及Giemsa染色，光鏡觀察，并對(duì)石蠟切片采用ABC法進(jìn)行免疫組化染色。所采用的單克隆抗體由Dako公司提供。另對(duì)6 μm厚石蠟切片采用Feulgen染色，以腫瘤周圍殘存的正常胸腺淋巴細(xì)胞作為內(nèi)對(duì)照，用細(xì)胞影像儀對(duì)腫瘤細(xì)胞的倍體進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定時(shí)采用的光源波長(zhǎng)為560 nm。

2　結(jié)果

2.　臨床資料　患者男，35歲，漸起干咳3周。體檢：頸靜脈怒張，全身淺表淋巴結(jié)、肝、脾不腫大。骨髓穿刺檢查未見異常。胸片顯示上縱隔增寬，見向兩側(cè)突起密度均勻的陰影。側(cè)位片見腫瘤位于前上縱隔。CT檢查見：前上縱隔腫塊大小5.5 cm×5 cm×5 cm，與周圍組織境界模糊。手術(shù)中見腫瘤位于胸腺部位，表面灰白色，高低不平，質(zhì)硬，與周圍組織分界不清，廣泛浸潤(rùn)周圍組織和胸骨。上腔靜脈亦被包裹在腫瘤組織內(nèi)，肺組織未見浸潤(rùn)。
2.2　病理檢查　肉眼見送檢腫瘤組織3塊，大者3.6 cm×2 cm×.5 cm，小者 cm× cm× cm。表面粗糙高低不平，灰白色，切面灰白色，質(zhì)硬。鏡下見：腫瘤細(xì)胞呈彌漫散在分布。腫瘤內(nèi)見可見寬窄不一、束狀、玻璃樣變性的纖維組織穿插于瘤細(xì)胞之間把瘤組織分割成不規(guī)則片塊狀。瘤細(xì)胞較大，大小形態(tài)較一致。細(xì)胞核大，呈圓形、卵圓形及略不規(guī)則形，核膜清晰。核染色質(zhì)呈粗顆粒狀，核可見嗜酸性小核仁。核分裂象個(gè)/0HPF。瘤細(xì)胞胞漿較豐富，淡伊紅色，細(xì)胞境界不清。瘤細(xì)胞間可見少數(shù)不規(guī)則分布的小血管。Giemsa染色瘤細(xì)胞漿呈紫藍(lán)色，胞漿內(nèi)未見顆粒。腫瘤內(nèi)可見大片壞死，在腫瘤的邊緣可見瘤細(xì)胞浸潤(rùn)周圍脂肪結(jié)締組織，并可見少量萎縮的胸腺組織。
2.3　免疫組化　瘤細(xì)胞表達(dá)LCA陽(yáng)性、L26陽(yáng)性、IgA及κ弱陽(yáng)性。瘤細(xì)胞表達(dá)IgM、IgG、λ、UCHL、Mac387、cytokeratin、vimentin及p53陰性。
2.4　腫瘤細(xì)胞DNA定量測(cè)定　腫瘤細(xì)胞呈高異倍體，DNA質(zhì)量的分布呈高度異質(zhì)性。瘤細(xì)胞DNA質(zhì)量主峰值為7.95 pg，DNA指數(shù)為2.50，變異系數(shù)0.22；瘤細(xì)胞DNA質(zhì)量次峰值為9.68 pg，DNA指數(shù)為.35，變異系數(shù)為0.55。

3　討論

縱隔內(nèi)原發(fā)性淋巴瘤罕見，其大多數(shù)為淋巴母細(xì)胞型淋巴瘤〔〕，而原發(fā)性大B細(xì)胞性淋巴瘤則極少見。其臨床特點(diǎn)為：患者以年輕女性多見〔2〕，發(fā)病年齡23～75歲，平均33歲〔〕?；颊呖捎锌人?、胸痛、呼吸困難以及靜脈阻塞綜合征等。腫瘤位于前縱隔，并傾向于浸潤(rùn)周圍組織。本例臨床表現(xiàn)及生物學(xué)行為特點(diǎn)均與文獻(xiàn)報(bào)道一致。
本例腫瘤在光鏡下zui顯著的特點(diǎn)為：瘤細(xì)胞較大，形態(tài)一致，呈彌漫散在分布，瘤細(xì)胞間常有寬窄不一、硬化的纖維組織束帶穿插分割。細(xì)胞核呈圓形、卵圓形及不規(guī)則形，核仁圓而清楚，細(xì)胞漿較豐富，弱嗜堿性。腫瘤內(nèi)常見壞死，核分裂象可達(dá)～4個(gè)/HPF。Kurita等〔3〕報(bào)道腫瘤印片May-Giemsa染色在大多數(shù)瘤細(xì)胞胞漿內(nèi)可見嗜苯胺藍(lán)顆粒。電鏡下的特點(diǎn)為瘤細(xì)胞胞漿豐富，含有一些線粒體、核糖體和少量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。大多數(shù)瘤細(xì)胞胞漿內(nèi)含中等大小的(直徑<0.7 μm)有膜包裹的電子致密顆粒。在一些細(xì)胞內(nèi)可見較大的有膜包裹的電子透明顆粒。由于其電子致密顆粒形態(tài)類似于大顆粒淋巴細(xì)胞及大顆粒淋巴細(xì)胞白血病/淋巴瘤細(xì)胞內(nèi)的溶酶體，故Kurita認(rèn)為嗜苯胺藍(lán)顆?？赡軄?lái)源于溶酶體。
關(guān)于該腫瘤的起源，目前多認(rèn)為其可能來(lái)源于胸腺內(nèi)B淋巴細(xì)胞〔2，3〕。胸腺髓質(zhì)內(nèi)B淋巴細(xì)胞可陽(yáng)性表達(dá)所有B淋巴細(xì)胞標(biāo)記，并可表達(dá)IgM、IgD陽(yáng)性，偶而IgA陽(yáng)性，但I(xiàn)gG陰性。Kurita等的病例瘤細(xì)胞表達(dá)CD20、CD22、CD23、CD24、OKDR和PCA陽(yáng)性，CD9和CD20陰性，說明其來(lái)源于胸腺B淋巴細(xì)胞。文獻(xiàn)報(bào)道由于瘤細(xì)胞可表達(dá)漿細(xì)胞抗原標(biāo)記PC和PCA陽(yáng)性，提示其為向B細(xì)胞分化的終末細(xì)胞〔2，3〕。本例腫瘤位于胸腺部位，周圍可見殘留的胸腺組織，免疫組化染色瘤細(xì)胞表達(dá)B淋巴細(xì)胞標(biāo)記陽(yáng)性，支持其起源于胸腺B淋巴細(xì)胞。
鑒別診斷：()霍奇金病：其雖以女性青年多見且多為結(jié)節(jié)硬化型，但其有典型的雙核R-S細(xì)胞及其它各型R-S細(xì)胞，背景細(xì)胞多樣化，有較多的反應(yīng)性淋巴細(xì)胞及組織細(xì)胞，免疫組化染色瘤細(xì)胞表達(dá)Leu-M及Ki-陽(yáng)性。本例腫瘤細(xì)胞形態(tài)較單一，不見以診斷性R-S細(xì)胞為代表的系列腫瘤細(xì)胞。瘤細(xì)胞表達(dá)B淋巴細(xì)胞標(biāo)記陽(yáng)性。(2)胸腺瘤：有上皮細(xì)胞及淋巴細(xì)胞兩種細(xì)胞成分，上皮性細(xì)胞形態(tài)多樣，可呈梭形，瘤細(xì)胞可表達(dá)keratin、Leu-7和CEA陽(yáng)性及thymulin和thymosin α陽(yáng)性。本例腫瘤只見單一細(xì)胞成分，不見梭形細(xì)胞，瘤細(xì)胞呈彌漫散在分布，無(wú)排列成巢的趨勢(shì)，瘤細(xì)胞表達(dá)上皮性標(biāo)記陰性。(3)精原細(xì)胞瘤：其好發(fā)于男性，男女之比5∶。瘤細(xì)胞胞境界清楚，核仁大而明顯，可排列成小巢狀或不規(guī)則腺泡狀及梁索狀，間質(zhì)內(nèi)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)較明顯，可見上皮樣肉芽腫，瘤細(xì)胞表達(dá)胎盤堿性磷酸酶、Leu-7陽(yáng)性。本例腫瘤則以女性多見，瘤細(xì)胞呈彌漫散在分布，核仁較小而細(xì)胞境界不清，瘤細(xì)胞表達(dá)B淋巴細(xì)胞標(biāo)記陽(yáng)性。(4)間變性大細(xì)胞淋巴瘤：70%的間變性大細(xì)胞淋巴瘤可累及縱隔〔4〕，其腫瘤細(xì)胞形態(tài)多樣化，常有花冠狀多核巨細(xì)胞、胚胎樣巨核細(xì)胞，瘤細(xì)胞表達(dá)CD30(Ki-或HerH2)陽(yáng)性。本例腫瘤形態(tài)較單一，不見花冠狀巨核細(xì)胞和胚胎樣巨核細(xì)胞，瘤細(xì)胞表達(dá)CD30(Ki-或HerH2)陰性。
本例腫瘤細(xì)胞DNA呈高異倍體，DNA質(zhì)量的分布呈高度異質(zhì)性。DNA質(zhì)量主峰值為7.95 pg，DNA指數(shù)為2.50，次峰值為9.68 pg， DNA指數(shù)為.35，手術(shù)時(shí)見腫瘤在縱隔內(nèi)廣泛浸潤(rùn)性生長(zhǎng)并浸潤(rùn)胸骨，反映了腫瘤細(xì)胞呈高度惡性。文獻(xiàn)亦報(bào)道該腫瘤預(yù)后差〔〕，大多數(shù)病例抗腫瘤治療效果不佳?；颊叽婊顣r(shí)間4～22個(gè)月，平均僅存活6個(gè)月〔2〕。該腫瘤的治療以為主，Lavabre-Bertrand等認(rèn)為，盡管在開始階段就應(yīng)對(duì)腫瘤進(jìn)行積極的，然而放射治療或手術(shù)治療亦屬必要，因?yàn)槟[瘤可較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)僅局部發(fā)展〔〕。